活性氧（reactive oxygen species, ROS）荧光探针系列之：
CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化应激检测试剂
背景需求：
氧化应激是由于反应性活性氧物质ROS产生和细胞清除ROS的不平衡导致的，ROS与核酸、蛋白质和脂质反应导致细胞和组织损伤。ROS的过多累积往往引起某些疾病的发生，包括炎症、动脉粥样硬化、衰老以及衰老相关的退行性疾病等。为此，ROS产生及其治病机理的研究越来越受到科学家的关注。
基本介绍：
CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）是专门设计用来可靠检测活细胞内活性氧ROS的一系列荧光探针。这些细胞膜渗透性的试剂当处于还原态时无荧光或极弱荧光，一旦被氧化后发出强荧光。
Thermo Fisher (Invitrogen)提供三种CellROX氧化应激试剂，CellROX Green Reagent是一种DNA染料，一旦氧化后与DNA结合，因此，信号主要定位在细胞核和线粒体。相反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的荧光信号定位在细胞质。CellROX氧化应激试剂产生的荧光皆可用传统的荧光显微镜、高内涵筛选仪器（HCS）、流式细胞仪、荧光酶标仪或高通量筛选（HTS）。还与各种台式仪器兼容，比如FLoid™，Tali™，和Attune™仪器。
产品优势：
CellROX氧化应激试剂（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下优势：
◇ 染色流程非常简单（见Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程图），试剂直接加入完全培养基或缓冲液内的细胞。
◇ 与传统的ROS检测探针相比，光稳定性非常好。另外，某些CellROX氧化应激试剂经后期的甲醛固定和去污剂透化处理后，仍维持良好的荧光信号（见Table 1. ROS检测方法的比较表）。
| CellROX Deep Red Reagent | CellROX Orange Reagent | CellROX Green Reagent | DCFH-DA | DHE | |
| Readout | CellROX探针本身是还原态，无荧光，一旦氧化后发亮绿色、橘色或深红色荧光。CellROX具细胞膜渗透性，能轻松加载进入活细胞。 | 本身无荧光，氧化后发强绿色荧光。具细胞膜渗透性。 | 本身蓝色荧光，进入细胞氧化后，与DNA结合生成红色荧光。 | ||
| Common filter set | Cy5 | RFP | FITC | FITC | Suitable filter |
| Ex/Em (nm) | 640/665 | 545/565 | 485/520 | 504/529 | 518/606 |
| Live cell–compatible | Yes | Yes | Yes | Yes | Yes |
| Labeling in complete medium | Yes | Yes | Yes | No | Yes |
| Formaldehyde-fixable | Yes | No | Yes | No | No |
| Detergent-resistant | No | No | Yes | No | No |
| Compatible platforms | *Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer |
*Imaging *HCS *Flow cytometry *Tali image-based cytometer *Floid cell imaging station *Attune Acoustic Focusing Cytometer |
*Imaging *HCS *HTS *Flow cytometry *Floid cell imaging station |
*Imaging *HCS |
◇ 通过对内皮细胞维生素K3诱导的ROS生成的抑制实验，发现CellROX氧化应激试剂特异性检测ROS（见Fig 2 基于CellROX氧化应激试剂定量和统计分析氧化应激水平）。
A）CellROX Green Reagent.在MatTek激光共聚焦专用玻底培养皿内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。向某些对照和维生素K3处理孔内加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50µM）。之后细胞用CellROX Green Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Zeiss Axiovert倒置显微镜下检测（40X物镜）。N-乙酰半胱氨酸处理抑制TBHP诱导生成的ROS，证实CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。
B）CellROX Orange Reagent.在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含TBHP（200µM）或不含TBHP的培养基37℃处理2h。向某些对照和TBHP处理孔内加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10µM）。之后细胞用CellROX Orange Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP诱导产生的ROS，证明CellROX检测到的荧光信号来自化合物诱导产生的ROS。
C）CellROX Deep Red Reagent.在96孔板内接种培养牛肺动脉内皮细胞（BPAE）。之后用含维生素K3（100µM）或不含维生素K3的培养基37℃处理1h。在孵育的后30min向某些对照和维生素K3处理孔内加入超氧化物清除剂MnTBAP（100µM）。之后细胞用CellROX Deep Red Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培养基内37℃孵育30min。细胞经PBS清洗后，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。
◇CellROX氧化应激试剂能偶与其他细胞活力检测探针联合检测，是一种非常有用的多重荧光方法来测定大量的细胞现象（见Fig 3 人U2-OS细胞的氧化应激检测）。
Fig 3.表达Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤细胞（U2-OS）用维生素K3(Menadione, 100µM)处理1h。之后用CellROX Green Reagent（5µM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。细胞清洗后置于活细胞成像液内检测。
CellROX订购信息：以上所有产品均为Life（Invitrogen）原装正品，原始包装为10×50 µg（10支50µg单个包装构成）。我司对C10444进行拆开销售，特惠价为1845元/支，单支50µl，现货销售，欢迎订购。
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 报价（元） | 小包装供货 |
| C10422 | CellROX Deep Red Reagent 氧化应激探针（深红色） | 5 x 50 uL | 6205 | 否（50 µl） |
| C10443 | CellROX Orange Reagent 氧化应激探针（橙色） | 5 x 50 uL | 6261 | 否（50 µl） |
| C10444 | CellROX Green Reagent 氧化应激探针（绿色） | 5 x 50 uL | 6198 | 是（50 µl） |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归欧宝体育平台app下载 生物/MKBio懋康所有】
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