组织消化(Tissue Dissociation)专题 — —原代细胞/肿瘤细胞制备

  • 杨, 梅艳
  • 2019年8月9日
  • 技术专栏
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组织消化(Tissue Dissociation)专题— —原代细胞/肿瘤细胞制备

搜索关键词:

组织消化 Tissue dissociation;原代细胞;肿瘤细胞;细胞外基质;消化酶;胶原酶;中性蛋白酶;透明质酸酶;木瓜蛋白酶;DNase I;胰酶;胰酶抑制剂;

基本描述:

细胞原代培养具有广泛的生理意义,不仅可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,还可服务于临床实践,用于药物筛选等前期研究。所谓原代培养就是将动物机体的各种组织,使用各种酶(比如胰蛋白酶、胶原酶)、螯合剂(如EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,并置于合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,并保持原有的基本性质的过程。通常将第一代至第十代以内的细胞培养过程称为原代培养。

原代培养最关键的一步便是获得需要的原代细胞,并维持其最佳的细胞活力,以提高成功培养和后期研究的几率。原代细胞制备最常用的方法即是酶解法,根据组织类型和对应的组织构造,常用以下一种或者多种酶组合的方法来达到水解目的。

1. 胶原酶 Collagenase

作为一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。

我司(MKbio,懋康生物)提供的胶原酶来源于溶组织梭菌(Clostridium histolyticum),是一种酶粗提物,不仅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能够降解天然胶原和网状纤维;还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异,并结合欧宝体彩下载 团体的欧宝体彩下载 成果,应用上分类见下:

胶原酶类型 组分特征和应用
I型胶原酶(Type 1) 相对均量的多种酶活(包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性);通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的细胞制备。
II型胶原酶(Type 2) 含更高的梭菌蛋白酶活性;通常用作心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织的细胞制备。
III型胶原酶(Type 3) 含较低的蛋白水解活性;常用于乳腺细胞的制备;
IV型胶原酶(Type 4) 含较低的胰酶活性;通常用于胰岛制备,和维持受体完整性比较重要的其他研究。也可用于髓系细胞制备。
V型胶原酶(Type 5) 部分纯化型,含更高的胶原酶和酪蛋白活性,更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。适用于胰岛制备。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1001-100MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 1) 100mg 280 现货
MX1001-500MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 1) 5×100mg 1260 现货
MX1001-1000MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 1) 10×100mg 2200 现货
MX1002-100MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 2) 100mg 280 现货
MX1002-500MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 2) 5×100mg 1260 现货
MX1002-1000MG Collagenase I 胶原酶I型(Type 2) 10×100mg 2200 现货
MX1003-100MG Collagenase III 胶原酶III型(Type 3) 100mg 540 现货
MX1003-1000MG Collagenase III 胶原酶III型(Type 3) 1g 3300 现货
MX1004-100MG Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4) 100mg 280 现货
MX1004-500MG Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4) 5×100mg 1260 现货
MX1004-1000MG Collagenase IV 胶原酶IV型(Type 4) 10×100mg 2200 现货
MX1005-100MG Collagenase V 胶原酶V型(Type 5) 100mg 520 现货
MX1005-1000MG Collagenase V 胶原酶V型(Type 5) 1g 2800 现货

2.中性蛋白酶Dispase II

中性蛋白酶(Neutral protease),商业名称dispase II,也称分散酶II。来源于Bacillus polymyxa,无支原体或其他动物病毒污染。一种非特异性金属蛋白酶,具比较温和的蛋白水解酶活性,对细胞损伤小且可维持细胞膜完整性,因此非常适合用于分离原代和继代细胞培养。研究显示Dispase II更能有效消化成纤维样细胞,相比较于上皮样细胞。Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1006-100MG Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶) 100mg 480 现货
MX1006-1000MG Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶) 1g 1400 现货
04942078001 Dispase II 分散酶II(中性蛋白酶) 1g 1800 Roche原装,现货

3.胰蛋白酶Trypsin

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶,由223个氨基酸残基组成的单链多肽,底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端,当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外,当切割位点任一边紧邻酸性残基,胰酶水解速率也会减缓。

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin),以无活性的胰蛋白酶原(Trypsinogen)形式分泌于胰腺中,通过切割其末端六肽而得到活化,产生天然单链形式的β-胰酶(β-Trypsin),随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin(由二硫键共价连接的二条肽链组成)。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制,有1)来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂;2)银离子;3)有机磷化合物,如氟磷酸异丙酯DFP;4)特定蛋白酶抑制剂,如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等;

胰蛋白酶(胰酶,Trypsin)的应用如下:

1)组织消化,需要配合其他蛋白酶如胶原酶和弹性蛋白酶一起使用;2)胰酶消化以收集细胞;3)线粒体分离;4)体外蛋白研究;5)从塑料或者玻璃培养表面消化以去除单细胞层;6)多种血细胞凝集过程;7)流式DNA分析的样品制备;8)胰酶消化肽图谱;9)指纹和测序研究;10)环境监测;11)降低组织培养的细胞密度;12)细胞亚培养;13)融合蛋白切割;14)纯化糖蛋白内消化得到糖肽。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX2002-25G Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末) 25g 135 现货
MX2002-100G Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250(粉末) 100g 360 现货
MX2003-100ML Trypsin (0.25%), Phenol Red 胰酶溶液(0.25%),含酚红 100ml 110 现货
MX2004-100ML Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red 胰酶-EDTA溶液(0.25%),含酚红 100ml 120 现货
另,特别提供TPCK处理胰酶(TPCK可灭活胰酶混有的胰凝乳蛋白酶chymotryptic活性,得到更纯和更高特异性的胰酶)。我司提供两种级别的TPCK-胰酶,分别达到组织培养和蛋白测序级。
MX2005-100MG Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶(TPCK处理)(组织培养级) 100mg 1012 现货
MX2006-100MG Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶(TPCK处理)(蛋白测序级) 100mg 1012 现货
MX2006-500MG 500mg 现货
Worthington

LS02120

Trypsin, Modified, Sequencing Grade(TPCK处理) 4×25 ug 299 原装进口,2周
Worthington

LS02115

Trypsin, Purified, Sequencing Grade II(TPCK处理) 4×25 ug 1175 原装进口,2周

4.Elastase弹性蛋白酶

弹性蛋白酶(Elastase),是另一种胰腺来源的丝氨酸蛋白酶,特异性识别并切割仅次于中性氨基酸的肽键。在所有蛋白酶中弹性蛋白酶非常独特,因其能水解天然弹力素。在血液和细菌内都有发现弹性蛋白酶。研究发现,弹性蛋白酶很适合用来消化肺脏以分离肺泡II型细胞。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1010-25MG Elastase, from Porcine Pancreas 弹性蛋白酶(猪胰腺) 25mg 560 原装进口,2周

5.Hyaluronidase透明质酸酶

透明质酸酶(Hyaluronidase)是一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称,一种糖蛋白,能随机裂解透明质酸,软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与粗制蛋白酶,如胶原酶Collagenase,联合使用于组织中分离活细胞。

品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1007-100MG Hyaluronidase 透明质酸酶 100mg 115 现货
MX1007-1000MG Hyaluronidase 透明质酸酶 1g 860 现货

6.Papain 木瓜蛋白酶

木瓜蛋白酶Papain,一种半胱氨酸蛋白酶,具有广泛且特异的切割活性。相比较于胰腺蛋白酶如胰酶,弹性蛋白酶,能降解大多数的蛋白底物。常用来分离组织内的神经元材质。三阴乳腺癌研究常使用木瓜蛋白酶分离Fab片段加速PET扫描,以改善疾病治疗。

木瓜蛋白酶的应用如下:1)比其他蛋白酶更温和的细胞分离(比如皮层神经元,视网膜,和平滑肌);2)蛋白结构研究,多肽图谱;3)红细胞表面修饰用于抗体筛选或鉴定;4)对IgG和IgM抗体处理以制备Fab;5)嵌入膜蛋白溶解;6)处理纯化的蛋白聚糖以生产糖肽;7)酶法伤口清创。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1008-25G Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶(试剂级) 25g 115 现货
MX1008-100G Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶(试剂级) 100g 325 现货

7.DNase I脱氧核糖核酸酶I

脱氧核糖核酸酶I(Deoxyribonuclease I,DNase I)常用在酶法细胞分离实验过程中,以降解消化体系内残留的核酸从而增加粘度和活力。DNaseI不会破坏细胞完整性。

产品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MF0401-15KU Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas

脱氧核糖核酸酶I,来源于牛胰腺

15KU 380 原装进口,2周

8.Trypsin Inhibitor胰酶抑制剂

胰酶抑制剂 Trypsin inhibitor,有多种来源。

本公司(MKbio)提供的为大豆源的胰酶抑制剂,能够失活胰酶活性,因此有时用于一些特定的细胞分离过程。

品订购信息:

货号 产品名称 规格 价格(元) 货期
MX1009-1G Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制剂 1g 719 现货

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

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