组织消化（Tissue Dissociation）专题— —原代细胞/肿瘤细胞制备
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组织消化 Tissue dissociation；原代细胞；肿瘤细胞；细胞外基质；消化酶；胶原酶；中性蛋白酶；透明质酸酶；木瓜蛋白酶；DNase I；胰酶；胰酶抑制剂；
基本描述：
细胞原代培养具有广泛的生理意义，不仅可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段，还可服务于临床实践，用于药物筛选等前期研究。所谓原代培养就是将动物机体的各种组织，使用各种酶（比如胰蛋白酶、胶原酶）、螯合剂（如EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，并置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，并保持原有的基本性质的过程。通常将第一代至第十代以内的细胞培养过程称为原代培养。
原代培养最关键的一步便是获得需要的原代细胞，并维持其最佳的细胞活力，以提高成功培养和后期研究的几率。原代细胞制备最常用的方法即是酶解法，根据组织类型和对应的组织构造，常用以下一种或者多种酶组合的方法来达到水解目的。
1. 胶原酶 Collagenase
作为一种蛋白水解酶，常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶，胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列（高频出现在胶原collagen，很少在其他蛋白中发现）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键。不同于其他蛋白酶，胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维，这种胶原纤维广泛存在结缔组织。
我司（MKbio，懋康生物）提供的胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶粗提物，不仅含有梭菌蛋白酶A（Clostridiopeptidase A），能够降解天然胶原和网状纤维；还含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等，分别用以水解存在结蹄组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等。目前商业化的胶原酶因所含组分的差异，并结合欧宝体彩下载 团体的欧宝体彩下载 成果，应用上分类见下：
| 胶原酶类型 | 组分特征和应用 |
| I型胶原酶（Type 1） | 相对均量的多种酶活（包括胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）；通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织的细胞制备。 |
| II型胶原酶（Type 2） | 含更高的梭菌蛋白酶活性；通常用作心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织的细胞制备。 |
| III型胶原酶（Type 3） | 含较低的蛋白水解活性；常用于乳腺细胞的制备； |
| IV型胶原酶（Type 4） | 含较低的胰酶活性；通常用于胰岛制备，和维持受体完整性比较重要的其他研究。也可用于髓系细胞制备。 |
| V型胶原酶（Type 5） | 部分纯化型，含更高的胶原酶和酪蛋白活性，更低胰酶水平以降低对膜蛋白和受体造成损伤。适用于胰岛制备。 |
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1001-100MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1001-500MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1001-1000MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 1） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1002-100MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1002-500MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1002-1000MG | Collagenase I 胶原酶I型（Type 2） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1003-100MG | Collagenase III 胶原酶III型（Type 3） | 100mg | 540 | 现货 |
| MX1003-1000MG | Collagenase III 胶原酶III型（Type 3） | 1g | 3300 | 现货 |
| MX1004-100MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 100mg | 280 | 现货 |
| MX1004-500MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 5×100mg | 1260 | 现货 |
| MX1004-1000MG | Collagenase IV 胶原酶IV型（Type 4） | 10×100mg | 2200 | 现货 |
| MX1005-100MG | Collagenase V 胶原酶V型（Type 5） | 100mg | 520 | 现货 |
| MX1005-1000MG | Collagenase V 胶原酶V型（Type 5） | 1g | 2800 | 现货 |
2.中性蛋白酶Dispase II
中性蛋白酶（Neutral protease），商业名称dispase II，也称分散酶II。来源于Bacillus polymyxa，无支原体或其他动物病毒污染。一种非特异性金属蛋白酶，具比较温和的蛋白水解酶活性，对细胞损伤小且可维持细胞膜完整性，因此非常适合用于分离原代和继代细胞培养。研究显示Dispase II更能有效消化成纤维样细胞，相比较于上皮样细胞。Dispase II还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1006-100MG | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 100mg | 480 | 现货 |
| MX1006-1000MG | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 1g | 1400 | 现货 |
| 04942078001 | Dispase II 分散酶II（中性蛋白酶） | 1g | 1800 | Roche原装，现货 |
3.胰蛋白酶Trypsin
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外，当切割位点任一边紧邻酸性残基，胰酶水解速率也会减缓。
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），以无活性的胰蛋白酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通过切割其末端六肽而得到活化，产生天然单链形式的β-胰酶（β-Trypsin），随后进行有限的自发裂解产生具水解活性的α-Trypsin（由二硫键共价连接的二条肽链组成）。胰酶水解活性可被多种化合物所抑制，有1）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；2）银离子；3）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯DFP；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；
胰蛋白酶（胰酶，Trypsin）的应用如下：
1）组织消化，需要配合其他蛋白酶如胶原酶和弹性蛋白酶一起使用；2）胰酶消化以收集细胞；3）线粒体分离；4）体外蛋白研究；5）从塑料或者玻璃培养表面消化以去除单细胞层；6）多种血细胞凝集过程；7）流式DNA分析的样品制备；8）胰酶消化肽图谱；9）指纹和测序研究；10）环境监测；11）降低组织培养的细胞密度；12）细胞亚培养；13）融合蛋白切割；14）纯化糖蛋白内消化得到糖肽。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX2002-25G | Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250（粉末） | 25g | 135 | 现货 |
| MX2002-100G | Trypsin 1:250 (Porcine) 猪源胰蛋白酶1:250（粉末） | 100g | 360 | 现货 |
| MX2003-100ML | Trypsin (0.25%), Phenol Red 胰酶溶液（0.25%），含酚红 | 100ml | 110 | 现货 |
| MX2004-100ML | Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚红 | 100ml | 120 | 现货 |
| 另，特别提供TPCK处理胰酶（TPCK可灭活胰酶混有的胰凝乳蛋白酶chymotryptic活性，得到更纯和更高特异性的胰酶）。我司提供两种级别的TPCK-胰酶，分别达到组织培养和蛋白测序级。 | ||||
| MX2005-100MG | Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK处理）（组织培养级） | 100mg | 1012 | 现货 |
| MX2006-100MG | Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白酶（TPCK处理）（蛋白测序级） | 100mg | 1012 | 现货 |
| MX2006-500MG | 500mg | 现货 | ||
| Worthington LS02120 |
Trypsin, Modified, Sequencing Grade（TPCK处理） | 4×25 ug | 299 | 原装进口，2周 |
| Worthington LS02115 |
Trypsin, Purified, Sequencing Grade II（TPCK处理） | 4×25 ug | 1175 | 原装进口，2周 |
4.Elastase弹性蛋白酶
弹性蛋白酶（Elastase），是另一种胰腺来源的丝氨酸蛋白酶，特异性识别并切割仅次于中性氨基酸的肽键。在所有蛋白酶中弹性蛋白酶非常独特，因其能水解天然弹力素。在血液和细菌内都有发现弹性蛋白酶。研究发现，弹性蛋白酶很适合用来消化肺脏以分离肺泡II型细胞。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1010-25MG | Elastase, from Porcine Pancreas 弹性蛋白酶（猪胰腺） | 25mg | 560 | 原装进口，2周 |
5.Hyaluronidase透明质酸酶
透明质酸酶（Hyaluronidase）是一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称，一种糖蛋白，能随机裂解透明质酸，软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与粗制蛋白酶，如胶原酶Collagenase，联合使用于组织中分离活细胞。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1007-100MG | Hyaluronidase 透明质酸酶 | 100mg | 115 | 现货 |
| MX1007-1000MG | Hyaluronidase 透明质酸酶 | 1g | 860 | 现货 |
6.Papain 木瓜蛋白酶
木瓜蛋白酶Papain，一种半胱氨酸蛋白酶，具有广泛且特异的切割活性。相比较于胰腺蛋白酶如胰酶，弹性蛋白酶，能降解大多数的蛋白底物。常用来分离组织内的神经元材质。三阴乳腺癌研究常使用木瓜蛋白酶分离Fab片段加速PET扫描，以改善疾病治疗。
木瓜蛋白酶的应用如下：1）比其他蛋白酶更温和的细胞分离（比如皮层神经元，视网膜，和平滑肌）；2）蛋白结构研究，多肽图谱；3）红细胞表面修饰用于抗体筛选或鉴定；4）对IgG和IgM抗体处理以制备Fab；5）嵌入膜蛋白溶解；6）处理纯化的蛋白聚糖以生产糖肽；7）酶法伤口清创。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1008-25G | Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（试剂级） | 25g | 115 | 现货 |
| MX1008-100G | Papain, BC Grade 木瓜蛋白酶（试剂级） | 100g | 325 | 现货 |
7.DNase I脱氧核糖核酸酶I
脱氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I）常用在酶法细胞分离实验过程中，以降解消化体系内残留的核酸从而增加粘度和活力。DNaseI不会破坏细胞完整性。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MF0401-15KU | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas 脱氧核糖核酸酶I，来源于牛胰腺 |
15KU | 380 | 原装进口，2周 |
8.Trypsin Inhibitor胰酶抑制剂
胰酶抑制剂 Trypsin inhibitor，有多种来源。
本公司（MKbio）提供的为大豆源的胰酶抑制剂，能够失活胰酶活性，因此有时用于一些特定的细胞分离过程。
产品订购信息：
| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格（元） | 货期 |
| MX1009-1G | Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制剂 | 1g | 719 | 现货 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】
欧宝体彩下载 是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持”品质保障”的原则为广大客户提供优质产品。