描述
Frozen-EZ酵母转化试剂盒Ⅱ
产品亮点
快速：可以在不到10分钟的时间内制备具有高转化效率的酵母细胞。
简单：用载体DNA在不到1小时的时间内用单个或多个质粒转化的简便方法。
用途广泛：可与酿酒酵母以及其他真菌（包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和巴斯德毕赤酵母）一起使用。与环状和线性DNA兼容。
产品描述
与现有方法相比，Frozen-EZ酵母转化II试剂盒旨在使酵母转化和文库筛选更加容易和高效。用Frozen-EZ Yeast Transformation II试剂盒制备的酵母细胞可立即用于转化，或可储存（即≤-70°C）以备后用。用该试剂盒制备的酵母可以用环状和线性DNA转化。另外，Frozen-EZ酵母转化II试剂盒可与其他真菌一起使用，包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和牧羊犬。
技术指标
感受态细胞稳定性 -70°C≥1年
处理时间 ≤15分钟
产品储存 0-4°C
转化DNA输入 0.2-1.0微克
转型效率 10 5 – 10 6 CFU /微克质粒DNA。
常见问题
Q1：该套件中有什么？它如何工作？
该套件中使用的程序在某种程度上类似于基于锂阳离子的方法进行设计。不涉及原生质球步骤。该机制可能涉及一些我们尚不完全了解的代谢途径。
问题2：此套件可用于白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或巴斯德毕赤酵母吗？
是。根据其他实验室和我们实验室的数据，该试剂盒在白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或毕赤酵母以及啤酒酵母中也能正常工作。
问题3：我的感受态酵母细胞在-70°C以下可以保存多长时间？
在-70°C以下储存半年后，转换效率不会降低。6个月后，转换效率逐渐开始下降。
Q4：我应该如何解冻储存的冷冻感受态细胞？
在室温下解冻。
问题5：冻结和解冻的频率会影响转化效率吗？
在冷冻的第一个周期后，我们通常会看到转化子增加10-30％。您可以重新冷冻和融化感受态酵母细胞3-4次，而对转化效率没有明显影响。进一步的冻融循环不利地影响转化效率。
问题6：在转化的第2步中，我是否需要严格在30°C下孵育？
不能。温度在30°C至37°C之间处于最佳温度范围。低于或高于此范围的温育会大大降低转化效率。
Q7：是否可以不经纯化直接使用限制性酶消化的DNA？
是。不同的消化缓冲液对转化效率的影响很小。您应该通过提高消化反应中DNA的浓度，尝试将每个转化实验的DNA体积保持在5 µl。
Q8：我应该在选择性板上撒多少转化混合物？
对于大多数环形质粒转化，50 µl就足够了。但是，如果您使用线性化DNA或使用多个选择标记，则可以在每块板上上样多达200 µl的转化混合物，以增加转化体的数量。转化子的数量随着施加到每个板上的转化混合物的数量线性增加。
Q9：我需要使用带有山梨糖醇的平板吗？
否。请使用适合您实验的任何平板。
Q10：我需要添加载体DNA吗？
不需要。不需要载体DNA。
引文
Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species.
The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength.
