描述
DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 细胞直接PCR裂解液
【单瓶试剂，细胞裂解+PCR一步到位】
产品关键词：
Viagen Biotech; DirectPCR® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K 蛋白酶K；302-C (301-C)；
产品介绍：
Viagen DirectPCR® DNA Extraction System（DirectPCR® DNA提取系统）是一种单管系统，用于从小鼠尾巴，耳片，卵黄囊和培养细胞内快递制备DNA。Viagen Biotech, Inc科学家开发的专利组分（正在申请专利）允许用DirectPCR® DNA Extraction System获得的DNA提取物与基因分型用的基因组PCR兼容。生物样本的粗提物与许多分子生物学级的试剂比如PCR都难以兼容，部分原因在于粗提物内含有抑制剂。DirectPCR®不仅介导生物样品的快速裂解，而且含有抑制剂，能够有效抑制PCR扩增用粗提裂解物中存在的抑制效应，同时最大程度保持释放出来的基因组DNA的完整性。专利申请中的DirectPCR®操作起来，完全消除任何溶液转移或开管步骤，根本上节省了大量时间和精力。
产品特点：
1）省时：更少的动手时间；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；
2）省钱：仅需成本的反应流程；
3）安全：无有机试剂；
4）环保：更少消耗（有机试剂，管子，枪头等等）
5）可靠有效：100%成功率保证高产量
简单流程：
1）用DirectPCR®裂解细胞；
2）85℃孵育45min；
3）取1μl裂解液进行PCR基因型研究。
详细流程：
1）10cm细胞培养板细胞，使用添加新鲜制备的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 细胞裂解液重悬细胞。蛋白酶K在DirectPCR®中稳定保存~24h。如果处理少量细胞，会很难称量蛋白酶K粉末，可直接使用Viagen提供的基因组PCR级的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用浓度为0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）。【注意】：若使用小量细胞，可用去离子水稀释DirectPCR®高达10倍，然后使用合适更多体积的裂解液用于PCR。见表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell)起始使用条件。
2）置于旋转杂交炉中，55℃转动管子处理5-6h或直到看不见组织团。若有必要，能过夜裂解样本，不会影响效率。完全裂解至关重要。要想获得更具有重复性的结果，中途摇动一下瓶子以更换管子的位置一次，最好在处理2-3h之后。
3）水浴锅内85℃孵育粗提液45min。【可选】于步骤4）前离心10s沉淀毛发。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不会降低效率。
4）每50μl PCR反应体系加入0.5-1.0μl裂解液。推荐PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。
表1，DirectPCR®Lysis Reagent (Cell) 起始使用条件。
| plate (# cells) | Tube size (ml) | DirectPCR-Cell (μl) | Dilution (fold) | Lysates (μl)/50μl PCR rxn |
| 96 well* | 0.75 | 50-70 | 1 | 1-1.5 |
| 96 well** | 0.75 | 60-80 | 2 | 2-3 |
| 24 well* | 0.75 | 70-100 | 1 | 1-1.5 |
| 6 well* | 0.75 | 100-140 | 1 | 1-1.5 |
| 10cm* | 1.5ml | 200-300 | 1 | 1-1.5 |
* Lysis using rotation hybridization oven.
** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted. Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs. Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.
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| 品牌 | 名称 | 货号 | 规格 |
| Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell) | 301-C | 50ml |
| Viagen Biotech | DirectPCR Lysis Reagent (Cell)) | 302-C | 100ml |
| Viagen Biotech | Genomic PCR Grade Proteinase K Solution | 501-PK | 5ml |
下载：DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual
— —Written/Edited by V. Shallan【版权归欧宝体育平台app下载 生物/MKBio懋康所有】
