FormuMax的脂质体如何制造？
我们用于研发的脂质体通常通过乙醇水合和挤出方法生产。简要地说，首先将脂质混合物溶于乙醇，然后在高于脂质主相转变的温度下用水合溶液（即HEPES缓冲的10％蔗糖溶液或硫酸铵溶液）进行水合。通过使用挤出机通过聚碳酸酯膜挤出来实现脂质体的小型化。通过DLS粒度仪测量的最终粒度通常为90-120nm。
我们也可以使用超声波（带有探头）来生产小体积的脂质体。用这种方法也可以实现小的脂质体粒径，尽管粒径分布可能较宽，这对于大多数应用而言不是问题。优点是：1）对小体积至关重要的最小的过程中样品损失； 2）取决于实际脂质成分的较短的 处理 时间。
对于带有载药量为铵梯度的脂质体，通过对8-10体积的10％蔗糖进行渗滤（弹药筒MWCO 100k-300K）来生成跨膜铵梯度。
所有脂质体产品均通过0.2um过滤器进行无菌过滤，并在BSC罩中放入高压灭菌的小瓶中。
典型的产品释放分析包括：
- 粒径，半峰和多分散性（Brookhaven ZetaPALS）
- Zeta电位（Brookhaven ZetaPALS）
- pH值
- 总脂质浓度（斯图尔特分析）
- 总或游离药物浓度（UV，荧光或HPLC）
- 游离药物浓度
- 包封效率：根据游离和总药物浓度计算
接收和检查脂质体产品
我们所有的脂质体产品均包装妥当，并使用带¾英寸聚苯乙烯泡沫塑料内盒的大盒子冷藏过夜（或第二天）。我们已经测试过，夏天在加利福尼亚州，把车内的温度保持在10°C可以保持两天。小心地打开盒子，里面应该感觉凉爽。打开小瓶的包装，并检查以确保没有小瓶破裂。目视检查每个小瓶中的脂质体悬浮液，以确保没有可见的颗粒/聚集体。脂质体应在2-8°C冷藏保存。有时，由于通关延误，包裹可能会在运输中持续几天，而对于国际运输来说，这已经发生了几天。对于大多数产品，几天内意外暴露于环境温度通常不是问题。应仔细检查产品的浊度和聚集。
如何从小瓶中转移脂质体？
从小瓶中转移脂质体的最佳方法是使用 无菌针头 注射器。这样，小瓶中剩余的脂质体悬浮液保持密封和清洁。您也可以使用带有无菌尖端的移液器进行移液，但是最好在干净的环境（例如BSC罩）中进行移液。
如果意外将其冷冻，脂质体是否还好？
这取决于。脂质体本身实际上可以在冷冻和融化后存活。因此，普通脂质体很可能会保留其原始粒度，并且仍然可以使用。脂质链越长，脂质体越稳定。因此，应特别注意短链DPPC脂质体和DOPC，POPC脂质体。仔细检查浊度是否已改变以及是否发生聚集。如果您有粒度仪，请检查粒度。
但是，对于包含药物装载电池的脂质体，例如硫酸铵脂质体，铵梯度可能已经崩溃，并且可能失去了其装载药物的能力。建议使用已知药物进行测试加载。
用脂质体应避免的事情？
由具有饱和烃链的脂质制备的脂质体实际上非常坚固。但是，有几件事需要注意。
- 请勿与氯仿，甲醇，乙醇，DMSO，乙醚等有机溶剂混合。氯仿会破坏脂质体。甲醇或乙醇会软化或溶解膜，具体取决于所用的量（最高10w / v％是可以的）。
- 不要添加表面活性剂，除非您故意溶解脂质体。
- 不要加热至接近或高于脂质主要相变温度，除非进行载药，这需要在相变温度以上进行孵育。
普通脂质体有什么作用？
普通脂质体主要用作体外/体内研究的安慰剂对照。还有其他几个有用的应用程序。某些亲脂性小分子可通过在升高的温度下简单孵育两部分而装载到脂质体中。在这种情况下，分子实际上被掺入了膜中，而不是被包裹在脂质体内。
铵梯度脂质体有什么用途？
铵梯度脂质体是内部包裹有硫酸铵的脂质体。外部硫酸铵已被生物相容性溶液替代，例如10％蔗糖或盐水。
迄今为止，铵盐脂质体是主动装载弱碱性脂质体的最佳脂质体系统。这是所谓的主动加载，因为通过在高于主要相变的温度下简单孵育将药物驱入预先形成的铵脂质体中。
请参阅参考：
伊曼纽尔（Emanuel N），凯达尔 （Kedar E），博洛廷（Blotin）EM，斯莫罗丁斯基（Smorodinsky）NI，巴伦霍尔兹（BarenholzY.）（1996）阿霉素负载的空间稳定免疫脂质体的制备和表征（Link）
哪些类型的化合物可以加载到铵脂质体中？
铵脂质体用于主动加载弱碱性和亲脂性的小分子。Ñ OTE不是所有的碱性化合物可以加载这种方式，取决于物理化学性质。 已经成功加载到铵脂质体中的化合物的例子包括阿霉素，长春新碱，拓扑替康等。这些化合物通常具有pKa值在7-9范围内的氨基/胺基。它们具有有限的水溶性，最重要的是Log P值> 0，这意味着去质子化时具有亲脂性。
何时使用PEG化脂质体和何时使用非PEG化脂质体？
将药物封装在脂质体内的潜在好处是增加其在不溶性化合物中的溶解度和/或改善PK / PD特性。如果提高药物溶解度是唯一的目标，则无需使用PEG化脂质体。可以测试由饱和PC或不饱和PC（如DOPC或POPC）制得的非PEG化脂质体能否提供令人满意的结果。然而，为了增加被包封的化合物的PK / PD，事情要稍微复杂一些，这完全取决于药物与脂质体的结合程度。载体本身具有固有的血液循环特征。在啮齿类动物中，t1/2= 20-30 hr（聚乙二醇化脂质体）和t1/2对于非PEG化脂质体，其＝ 8-15小时，取决于粒径。那么什么时候使用聚乙二醇化脂质体和何时使用非聚乙二醇化脂质体呢？这取决于药物在血液循环中与载体的结合程度。如果药物相对于载体的循环快速地从脂质体中泄漏出来，那么非聚乙二醇化的脂质体就足够了。以药物A为例，当将其包封在PEG化DSPC脂质体内时，在5小时的1/2时获得。在这种情况下，人们期望用非PEG化的DSPC脂质体可以获得相似的t1/2。另一方面，一种非常稳定地保留在脂质体内的药物，例如盐酸阿霉素（t1/2在啮齿动物中20至30小时），只有使用PEG化脂质体才能使脂质体获得最佳PK / PD，才有意义。
如何选择具有适当脂链长度的脂质体？
选择脂质链长度时有多种因素。脂质双层的主要功能是充当药物渗透屏障。脂质链越长，双层越紧密。最常用的脂质体是基于DSPC或HSPC的。但是，当药物保留时间仍然不足时，可以考虑使用更长的链脂质。我们有20：0PC，22：0PC甚至24：0PC的PEG化和非PEG化脂质体。
为什么DSPC或HSPC脂质体是最常用的脂质？
您可能会问为什么我们不只使用24：0PC脂质体，因为它提供了最慢药物释放的潜力？好吧，首先选择DSPC（或HSPC）的主要原因是它具有约55°C的最理想的主相变温度（Tm）。因此，当注入人体时，脂质体膜处于凝胶相的深处（其中脂质链紧密堆积，药物释放缓慢）。另一方面，脂质体需要制造（水合和挤出），比脂质的Tm高（5-10）摄氏度。对于DSPC脂质体来说，这不是问题，但是对于较长链的脂质，它变得越来越具有挑战性，因为某些设备无法承受高温。Tm见表 值和制备PC脂质体所需的水合/挤出温度。
血脂 |
Tm（摄氏度） |
水合/挤出温度（℃） |
DPPC（16：0PC） |
41 |
46-51 |
DSPC（18：0PC）/ HSPC |
55/54 |
60-65 |
20：0片 |
66 |
71-76 |
22：0片 |
75 |
80-85 |
24：0片 |
80 |
85-90 |
HSPC和DSPC有什么区别？
HSPC代表完全氢化的大豆PC。HSPC主要包含18：0PC（大约85％的DSPC和15％的DPPC）。其Ť米为约54℃。HSPC在商业产品中使用的像阿霉素®和DSPC在使用 DaunoXome®。
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