Calcein 钙黄绿素(常用的活细胞荧光探针)专题 (标签:多种颜色,蓝色、绿色,红色,深红色,多标实验)

  • 杨, 梅艳
  • 2019年9月2日
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Calcein 钙黄绿素(常用的活细胞荧光探针)专题

(标签:多种颜色,蓝色、绿色,红色,深红色,多标实验)

产品关键词:

Calcein, AM 钙黄绿素(绿色);Calcein Red 钙黄绿素红;Calcein Deep Red 钙黄绿素深红;碘化丙啶;CAS:148504-34-1;

背景介绍:

Calcein, AM,中文名钙黄绿素乙酰甲酯,CAS NO:148504-34-1,是最受欢迎的荧光探针之一,用来标记和监测活细胞的细胞功能。具有细胞膜渗透性,一旦进入细胞,被细胞内酯酶水解为钙黄绿素(Calcein),产生强烈的绿色荧光(Ex/Em= 490nm/515nm)。因不具细胞膜渗透性,从而能被保留在细胞内。

然而,Calcein, AM的单一荧光使其很难用于多标实验,特别是Calcein与GFP完全重叠的荧光光谱,使其不可能用在GFP转染细胞的多色标记实验。为了克服这一缺陷,我司懋康生物开发出Calcein Red和Calcein Deep Red两种类似物,使其能够替代Calcein AM用在活细胞的标记和功能分析的多重标记研究。

几种探针的基本特征:

表1 几种钙黄绿素(Calcein)系列探针的光谱特征

指示剂 指示剂编号 Ex/Em(nm) 检测滤片
Calcein, AM 钙黄绿素(绿色) MX3011-50UG 490/515 FITC
Calcein Red, AM 钙黄绿素红(红色) MX3013-1MG 560/574 TRITC,Cy3
Calcein Deep Red Acetate 钙黄绿素深红醋酸盐 MX3014-1MG 646/659 Cy5
Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝(蓝色) MX3015-1MG 360/445 DAPI

应用图片:

文献1:Yoshinori Hiraoka et al. Rapid Assessment of the Physiological Status of the Polychlorinated Biphenyl Degrader Comamonas testosteroni TK102 by Flow Cytometry. Appl Environ Microbiol. 2002 Apr; 68(4): 2031–2035.

图1:睾丸酮丛毛单胞菌(C. testosteroni)菌株TK102经Calcein, AM,PI双染后的荧光显微检测图片。(A)活细胞,仅有绿色荧光;(B)死细胞,仅有红色荧光;(C)透化处理细胞,中心是红色荧光,外缘是绿色荧光。

Fig 2. HeLa活细胞经Calcein Red(# MX3013)染色图。

操作流程(以Calcein Red,#MX3013为例):

A, 储存液制备

储存液配制范围可为1~5 mM,具体根据工作浓度来决定,建议提前配制成1000×储存液。若使用的工作液为5μM,那么可配制5mM的储存液,即往1mg Calcein Red AM(Mw:1015.79)内加入196 μl 细胞培养级别的DMSO(货号:MS4601-100mL)即可。储存液需要根据单次用量分装,-20℃避光干燥保存,一定要避免受潮,此种情况下可稳定保存数月。

B,20% Pluronic F-127制备【可选】

称取100mg Pluronic F-127粉末(货号:MS4301-100MG)中加入500μl DMSO,配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解过程需要在40-50℃加热20-30min。溶液室温保存,不用冷藏。如有结晶析出,可以重新加热后溶解,不影响使用。

C,染色步骤

大多数实验体系中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定Calcein Red AM的最佳工作浓度,以最低的探针浓度得到最好的荧光结果为筛选原则。

1) 取一管适量分装的储存液(1000×)置于室温,至少回温20min,低速离心后,用合适的缓冲液如PBS,HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

【注意】:有时可添加一定量的非离子表面活性剂如Pluronic F127到Calcein Red AM储存液内来增强其水溶性。制备染色工作液前,取一管Calcein Red AM储存液内加入等体积的20% Pluronic F127,使Pluronic F127的终浓度为0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可长期保存,需现配现用。

2) 对于贴壁细胞,先用胰酶-EDTA消化细胞,离心收集细胞(1000 rpm,3min)。对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。

3) 去上清,用PBS(或者其他缓冲液)清洗细胞2~3次,以充分去除残留的酯酶活性。

4) 用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞,37℃孵育20min~1h。

【注意】:1)若细胞自身含有机阴离子转运体,需加入丙磺舒(1-2.5mM)或者苯磺唑酮(0.1-0.25mM)到孵育体系内以降低去酯化的Calcein Red泄露到胞外;2)降低探针加载温度,可能会减少探针区室化现象。

5) 用PBS(或者其他缓冲液)洗涤细胞两次去除多余染料。

【注意】:如有必要,使用含有机阴离子转运抑制剂的缓冲液来进行细胞清洗;

6) 用含合适滤光片(Ex/Em= 560nm/574nm)的仪器进行检测。

产品订购:更大包装或产品技术问题,请来电/在线咨询,电话:021-54736159。QQ:2971634497。

产品名称 产品编号 规格 价格(元)
Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色,超纯级别) MX3011-50UG 50μg 210(促销价)
Calcein, AM, Ultra Pure Grade 钙黄绿素(绿色,超纯级别) MX3011-250UG 5×50μg 920(促销价)
Calcein Red, AM 钙黄绿素红(红色) MX3013-1MG 1mg 2500
Calcein Deep Red Acetate 钙黄绿素深红醋酸盐 MX3014-1MG 1mg 2500
Calcein Blue, AM 钙黄绿素蓝(蓝色) MX3015-1MG 1mg 1200

【好消息】:目前最高纯度的钙黄绿素乙酰甲酯(Calcein, AM,HPLC>97%)限时促销开始啦,本促销最终解释权归欧宝体彩下载 。本品长时间销售供货给国内各大欧宝体彩下载 机构,以质优价优获得各老师的青睐。50μg单只特惠包装,按照5μM的工作浓度,用于96孔板内活细胞检测(工作体积100μl)可以做100个样本。单个样本检测成本仅2元,非常划算。

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货号 名称 规格
MX3012-500T Calcein AM/PI Double Stain Kit 活细胞/死细胞双染试剂盒 500T
MZ8471-1G Probenecid 丙磺舒 1g
MZ8472-154MG Probenecid Sodium, Water Soluble 丙磺舒钠(水溶性) 2×77mg
MX4205-10MG Propidium Iodide 碘化丙啶 10mg

注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅能用作欧宝体彩下载 用途,不可他用。

— —Written/Edited by V. Shallan【版权归欧宝体育平台app下载 生物/MKBio懋康所有】